在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步，應(yīng)引起操作者重視。ELISA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

手工洗板人為因素比較大，實(shí)驗(yàn)人員必須經(jīng)驗(yàn)豐富，洗滌次數(shù)要足夠，沖擊力又不要太大，加入的洗液量以剛滿反應(yīng)孔為限，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈，同時(shí)防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要，否則易造成假陽(yáng)性。每次洗完板后，在吸水紙上輕輕拍干，拍板時(shí)要垂直，避免交叉感染。用力不能過(guò)猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離;吸水紙要一次性使用，應(yīng)使用不易脫落碎屑的吸水紙為宜。酶結(jié)合物不耐干燥，特別在較高的溫度下更易失活，所以拍干的反應(yīng)板應(yīng)盡量縮短在空氣中暴露的時(shí)間，時(shí)間越長(zhǎng)，吸光度值越低。手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種方法：

一、浸泡式
1.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；

2.用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；

3.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1～2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；

4.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；

5.重復(fù)操作步驟3和4，洗滌3～4次（或按說(shuō)明規(guī)定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。

微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。

洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%～0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。

二、流水沖洗式
流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來(lái)水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為徹底，且也簡(jiǎn)便、快速。

已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。